Kit rapide de détection d'antigène de sang total, kit à la maison d'essai de l'antigène 150-250ul

Avec l'instrument médical d'IVD pour faire le kit rapide neutralisant d'essai de l'anticorps SARS-CoV-2

Kit neutralisant d'essai de Fluerescent d'anticorps et essai rapide neutralisant d'anticorps

L'analyse pseudovirus-neutralisante d'anticorps a été exécutée comme décrit précédemment (5). Brièvement, des cellules de Vero ont été semées dans des 96 plats bons pour produire une couche unitaire à l'heure de l'infection. Des quantités de Pretitrated de rVSV-SARS-Cov-2 [phCMV3-SARS-CoV-2 la transitoire SARS-CoV-2-pseduotyped VSV-ΔG-GFP (protéine fluorescente verte) ont été produites par transfecting les cellules de HEK293T, atcc CRL-3216] ont été incubées avec le plasma humain en série dilué à 37°C pour 1 heure avant de s'ajouter aux couches unitaires confluentes de cellules de Vero (atcc CCL-81) dans des 96 plats bons. Des cellules ont été incubées pendant 12 à 16 heures à 37°C dans 5% Co2.Des cellules ont été alors fixées en paraformaldéhyde de 4%, souillé avec 1 μg/ml Hoechst, et reflètent utilisant une encre en poudre de CellInsight CX5 pour mesurer tout le nombre de cellules exprimant GFP. L'infection a été normalisée au nombre moyen de cellules atteintes de rVSV-SARS-CoV-2 a incubé avec le plasma humain normal. Le LOD a été établi As <1:20 on="" the="" basis="" of="" plasma="" samples="" from="" a="" series="" of="" unexposed="" control="" subjects=""> 50des titres (de concentration inhibitrice médiane) ont été calculés utilisant la régression de l'ajustement LogIC50 d'Un-site en prisme 8,0 de GraphPad.

Une analyse basée sur fluorescence de neutralisation de haut-sortie

Pour combler la lacune pour la sérodiagnose COVID-19 et l'évaluation de vaccin, nous avons développé une analyse basée sur fluorescence que mesure rapidement et sûrement la neutralisation d'un journaliste SARS-CoV-2 par des anticorps des spécimens patients. L'analyse a été établie sur une écurie mNeonGreen (mNG) SARS-CoV-2 où le gène de mNG a été machiné à l'ORF7 du génome viral (fig. 1a)10. L'ordre complet du mNG SARS-CoV-2 est décrit dans fig. supplémentaire. 1. La figure 1B dépeint l'organigramme de l'analyse de neutralisation de journaliste dans un format 96 bon. Le protocole d'analyse est détaillé dans des méthodes supplémentaires. Brièvement, des sérums patients ont été en série dilués et incubés avec le virus de journaliste. Après incubation à 37°C pour 1   h, des cellules de Vero CC-81 (pré-semées dans un plat 96 bon) ont été atteintes des mélanges de virus/sérum à une multiplicité de l'infection (MOI) de 0,5. À la courrier-infection de 16   h, les cellules mNG-positives ont été dosées utilisant un lecteur de représentation de haut-contenu (fig. 1B). Il convient noter que des cellules de Vero CC-81, pas cellules de Vero E6, n'ont été choisies pour le mNG analysent pour permettre la quantification précise des cellules fluorescentes. Soixante spécimens du sérum COVID-19 des patients Droite-ACP-confirmés et 60 des échantillons du sérum non-COVID-19 (archivés avant émergence COVID-19) ont été analysés utilisant le virus de journaliste. Pour des spécimens d'un certain COVID-19-positive, le positif courrier-viral des jours RT-PCR de collection témoin étaient disponible et sont indiqués dans le Tableau Table1.1. Après viral infection de journaliste, les cellules ont tourné le vert faute de sérum (fig. 1c, panneau inférieur) ; en revanche, l'incubation du virus de journaliste avec le sérum COVID-19 patient a diminué le nombre de cellules fluorescentes (panneau supérieur). Une courbe de réponse à dose donnée a été obtenue entre le nombre de cellules fluorescentes et le pli de la dilution de sérum (fig. 1d et fig. supplémentaire. 2), qui a tenu compte de la détermination du pli de dilution qui a neutralisé 50% de cellules fluorescentes (NT50). L'analyse de journaliste a rapidement diagnostiqué 120 spécimens à moins de 24   h : chacun des 60 sérums COVID-19 (spécimens 1-60) a montré NT positif50de 35 à 5711, et de chacun des 60 sérums non-COVID-19 (spécimens 61-120) a montré NT négatif50 <20>de 1).

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